什么是转染及常用转染方法
转染是将核酸导入真核细胞的过程。细胞既可通过稳定转染将DNA整合到其基因组中,也可通过瞬时转染以进行蛋白的暂时表达。细胞转染结合化学、物理和生物学三种方法来研究细胞环境中的基因功能和表达。其应用包括基因治疗、诱导多能干细胞(iPSC)的产生、基于RNA干扰(RNAi)的基因沉默以及治疗性抗体和蛋白质的生产。
常用转染方法
脂质和脂质体:阳离子脂质可形成包含DNA或RNA的脂质体以进行传递。这些脂质体可与细胞膜发生融合并将核酸释放进细胞中。
磷酸钙:磷酸钙可促进DNA与细胞表面的结合,使遗传物质通过内吞作用进入细胞。
阳离子聚合物:在基于聚合物的转染中,外源DNA可与阳离子聚合物,如聚乙烯亚胺(PEI)形成复合物,并通过内吞作用进入宿主细胞。
慢病毒转导:细胞会感染被修饰的慢病毒载体,而慢病毒载体会将其病毒RNA转化为双链DNA,进而整合到宿主基因组中进行传递。
微注射:首先把目标细胞置于显微镜下,然后使用细玻璃毛细管针将核酸直接注入细胞质或细胞核中。
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