间充质干细胞的扩增
间充质干细胞的扩增
一旦细胞达到约80%的汇合并且正在积极增殖时,传代培养细胞。
重要提示:在达到100%汇合之前进行传代细胞培养。小心地从含有人间充质干细胞汇合层的10 cm组织培养板中取出培养基。涂抹3-5 mL胰蛋白酶-EDTA溶液 (SM-2003-C),并在37℃培养箱中孵育3-5分钟。
用手掌轻轻拍板的侧面,检查板上的细胞完全脱离。
向板中加入5 mL间充质干细胞扩增培养基 (SCM015 or SCM045)。
轻轻旋转培养板以混合细胞悬液。将解离后的细胞转移到15 mL锥形管中。
将试管以300 × g离心3-5分钟以沉淀细胞。
丢弃上清液。
将含有8 ng/mL FGF-2的2 mL间充质干细胞扩增培养基(预热至37°C)加于锥形管,并彻底重悬细胞。
重要提示:请勿涡旋细胞。使用血细胞计数器计数细胞。
将细胞以5,000-6,000个细胞/cm2的密度接种到含有8 ng/mL FGF-2的间充质干细胞扩增培养基的适当培养瓶、板或孔中。
细胞可以2 × 106个细胞/小管的密度混入MSC生长培养基及10% DMSO(D2650)中冷冻。
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