ELISA实验方法之EIA检测过程
ELISA实验方法之EIA检测过程:
在试剂制备过程中将试剂置于冰上。建议为所有的标准品和样品设置至少双重复。
向每孔中添加100 μL 抗-“靶标”抗体。室温孵育1.5小时,并轻轻摇晃(1-2圈/秒)。您还可以在4 °C孵育过夜。
弃溶液并用1x 洗涤缓冲液(每孔200-300 μl)洗涤4次,可用多通道移液器或自动化的洗板仪完成洗涤。在每一步都将液体完全去除对于优秀的检测性能至关重要。在完成最后一次洗涤后,通过吸取或倾倒而将残留的洗涤缓冲液进行去除。将平板倒置,并用干净的纸巾将其吸干。
向相应的孔中添加100 μL的每种标准品、阳性对照和样品。确保包含了一个空白孔(仅含检测稀释液)。室温孵育2.5小时,并轻轻摇晃(1-2圈/秒),或4 °C过夜。
弃溶液并按照第3步洗涤4次。
向每孔中添加100 μL制备好的HRP-链霉亲和素溶液。室温孵育45分钟,并轻轻摇晃。建议孵育时间不少于45分钟。
弃溶液并按照第3步洗涤4次。
向每孔中添加100 μL TMB One-Step底物试剂(H项)。室温避光孵育30分钟,并轻轻摇晃(1-2圈/秒)。
向每孔中添加50 μL 终止液(I项)。立即测量450 nm处的吸光度。
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