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ELISA实验方法之磷酸化检测过程

今天着重介绍一下ELISA实验方法之磷酸化检测过程。

在使用前让所有试剂恢复至室温（18 - 25 °C）。建议为所有的样品或阳性对照设置至少双重复。

向相应的孔中添加100 μL的每种样品或阳性对照。用板支架盖上孔并在室温孵育2.5小时或4 °C过夜，并摇晃。

弃溶液并用1x 洗涤溶液洗涤4次。通过使用多通道移液器或自动洗板仪向每孔中填充洗涤缓冲液（300 µL）以进行洗涤。在每一步都将液体完全去除对于优秀的性能至关重要。在完成最后一次洗涤后，通过吸取而将残留的洗涤缓冲液进行去除。将平板倒置，并用干净的纸巾将其吸干。

向每孔中添加100 μL制备好的1X生物素化抗磷酸酪氨酸抗体。室温孵育1小时，并摇晃。

弃溶液。重复第3步的洗涤步骤。

向每孔中添加100 μL制备好的X HRP-链霉亲和素溶液（见试剂制备第6步）。室温孵育45分钟，并摇晃。

弃溶液。重复第3步的洗涤步骤。

向每孔中添加100 μL TMB One-Step底物试剂（H项）。室温避光孵育30分钟，并摇晃。

向每孔中添加50 μL 终止液（I项）。立即测量450 nm处的吸光度。

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