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ELISA实验方法之磷酸化检测过程

               

今天着重介绍一下ELISA实验方法之磷酸化检测过程。

在使用前让所有试剂恢复至室温(18 - 25 °C)。建议为所有的样品或阳性对照设置至少双重复。

向相应的孔中添加100 μL的每种样品或阳性对照。用板支架盖上孔并在室温孵育2.5小时或4 °C过夜,并摇晃。

弃溶液并用1x 洗涤溶液洗涤4次。通过使用多通道移液器或自动洗板仪向每孔中填充洗涤缓冲液(300 µL)以进行洗涤。在每一步都将液体完全去除对于优秀的性能至关重要。在完成最后一次洗涤后,通过吸取而将残留的洗涤缓冲液进行去除。将平板倒置,并用干净的纸巾将其吸干。

向每孔中添加100 μL制备好的1X生物素化抗磷酸酪氨酸抗体。室温孵育1小时,并摇晃。

弃溶液。重复第3步的洗涤步骤。

向每孔中添加100 μL制备好的X HRP-链霉亲和素溶液(见试剂制备第6步)。室温孵育45分钟,并摇晃。

弃溶液。重复第3步的洗涤步骤。

向每孔中添加100 μL TMB One-Step底物试剂(H项)。室温避光孵育30分钟,并摇晃。

向每孔中添加50 μL 终止液(I项)。立即测量450 nm处的吸光度。

网址:www.pschina.com.cn

电话:400-800-5586


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