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ELISA实验方法之夹心法检测过程

ELISA实验方法常用的有四种，今天介绍一下夹心法检测过程

在使用前让所有试剂和样品恢复至室温（18 - 25 °C）。建议为所有的标准品和样品设置至少双重复。
向相应的孔中添加100 μL的每种标准品和样品。盖上孔并在室温孵育2.5小时或4 °C过夜，并轻轻摇晃。
弃溶液并用1X 洗涤溶液洗涤4次。通过使用多通道移液器或自动洗板仪向每孔中填充洗涤缓冲液（300 µL）以进行洗涤。在每一步都将液体完全去除对于优秀的性能至关重要。在完成最后一次洗涤后，通过吸取或倾倒而将残留的洗涤缓冲液进行去除。将平板倒置，并用干净的纸巾将其吸干。
向每孔中添加100 μL制备好的1x 检测抗体。盖上孔并在室温孵育1小时，并轻轻摇晃。
弃溶液。重复第3步的洗涤步骤。
向每孔中添加100 μL制备好的链霉亲和素溶液。盖上孔并在室温孵育45分钟，并轻轻摇晃。
弃溶液。重复第3步的洗涤步骤。
向每孔中添加100 μL TMB One-Step底物试剂（H项）。盖上孔并在室温避光孵育30分钟，并轻轻摇晃。
向每孔中添加50 μL 终止液（I项）。立即测量450 nm处的吸光度。