蛋白质谱应用于哪些方面
蛋白质谱广泛用于生物样品的分析,适用于生物标记物发现、蛋白质组学研究和临床应用。与其他蛋白大规模鉴定的技术相比,质谱仪可进行复杂的分析,已经成为蛋白质组学的主要工具。
质谱已用于基于蛋白质结构、翻译后修饰和相互作用分析,以定量鉴定蛋白质。
蛋白质鉴定 通常涉及将蛋白质进行化学或酶消化成肽,然后通过质谱进行分析并使用计算方法或测序进行鉴定。
翻译后修饰 可以通过氨基酸残基质量的变化来进行确定。修饰位点可以通过测序或相关计算方法来进行定位。
对于聚糖分析与分析来说,需使用酶或化学方法从糖蛋白释放聚糖基团,然后将释放的聚糖衍生化以进行质谱分析。
蛋白质相互作用 通过特异性靶蛋白与任何相互作用的蛋白的亲和共纯化来进行确定,或在进行质谱分析之前使用尺寸排阻或离子交换色谱进行更全面的研究。
对于定量蛋白质组学而言,可以使用串联质量标记(TMT)和iTRAQ对具有稳定同位素的蛋白质或肽进行化学标记,或者通过掺入标记的氨基酸(SILAC)在代谢上进行蛋白质标记。通过将质谱峰强度与蛋白质丰度进行关联,可以对重同位素和轻同位素的掺入量进行比较,从而实现相对定量。为了进行绝对定量,可以在样品中掺入同位素标记的合成肽或蛋白质标准品,以进行选定的反应监测(SRM)分析
在蛋白质谱中,不同蛋白质和多肽的质量是通过测量其气相离子的m/z(质荷比)来进行确定。质谱仪首先会使用离子源将蛋白质分子转换为气相离子。接下来,质量分析器根据m/z比对离子化的分析物进行分离。然后,检测器会记录下每个m/z值处的离子数。MALDI和电喷雾电离(ESI)通常被用于对肽或蛋白质进行电离。
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