植物组织培养实验的培养基制备
从包装粉末制备
粉末培养基极易吸湿,必须防止空气中的水分对其潮解。单个包装的全部粉末应尽可能在打开后立即使用。不建议以浓缩形式制备培养基,否则一些盐复合物可能会沉淀。添加到培养基中的补充剂可能会影响其保质期和储存条件。制备培养基的基本步骤如下:
1、量出组织培养级纯水(产品编号:W3500)最终所需体积的90%左右,举例来说,如果最终体积为1000 mL,则量出900 mL。选用两倍于最终体积大小的容器。
2、在搅拌水的同时加入粉末状培养基并搅拌直至完全溶解。某些情况下可能需要加热将粉末溶解。
3、用少量组织培养级纯水冲洗原始容器,以去除痕量的粉末。添加到步骤2的溶液中。
4、加入所需的热稳定补剂(例如蔗糖、胶凝剂、维生素、生长素、细胞分裂素等)。
5、添加额外的组织培养级纯水,使培养基达到最终体积。
6、一边搅拌,一边添加NaOH、HCl或KOH,以将培养基调节至所需pH。
7、如果加入胶凝试剂,则加热直至溶液澄清。
8、根据需要,在高压灭菌之前(或之后)将培养基加样到培养皿中。高压灭菌后加入热不稳定的组分。
9、在经过验证的杀菌釜中,以1 kg/cm2(15 psi)、121°C对培养基进行灭菌,持续时间为培养基灭菌实验方案所述时间长度。
10、待培养基冷却后使用。
粉末状培养基和碱性盐混合物仅供实验室使用。
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