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防止和消除细胞培养污染的一般技巧

在生物安全柜内工作


在生物安全柜内工作时,记住气流是帮助维持无菌环境的关键,这一点很有帮助。后方和前方通风口应始终保持畅通,以获得有效的气流。在进行任何实际操作之前,应在机柜中放置所有必需的材料,以尽量减少操作员袖子和手上污染物转移的可能性。

在将待用物品放入机柜之前,至少将气流打开20分钟。放入机柜的所有物品必须先喷洒70%(v/v)无菌酒精,然后用无绒布擦拭,以防止灰尘和微粒进入机柜。在打开任何顶部或容器之前确保气流良好,使气流可吹扫到可能已经进入工作区域的颗粒。

移液和气溶胶的预防

一次性塑料移液管——也称为血清移液管,容量为1-100 mL——是细胞培养不可或缺的工具。这些必须单独包装,确保无菌。遵守以下指导可最大限度地减少与移液相关的污染和安全风险。

使用自动移液器辅助装置,每个移液器辅助装置限制在单个机柜中使用。 为避免污染,请定期拆卸移液器辅助部件并消毒。确保移液器辅助装置的过滤器储存良好并定期更换。

尽可能使用堵塞的移液器(顶部用棉花塞住),特别是在转移介质时。 避免将液体吸入移液器塞。如果塞子意外弄湿,请立即更换移液器过滤器。

展开一部分,将血清移液管末端安装到移液器辅助装置,然后取下纸套,从而避免接触移液管。

为避免产生污染性气溶胶,请勿在培养基或移液器中产生气泡。

消毒

设计用于培养废物、工作台和设备的消毒/净化的方法不仅须使污染风险降至最低,而且对实验室人员必须安全。使用浓缩的消毒剂时,请始终穿戴合适的个人防护装备(PPE),如手套和护目镜。选择的手套应防处理的物质。制造商的图表有助于确定给定任务的最佳手套。主要消毒剂的分组及其相对优点可归纳如下:

次氯酸钠或漂白剂

良好的通用消毒剂

可抗病毒

对金属具有腐蚀性—不得用于金属表面(如离心机)

易被有机物灭活,应经常制备新鲜溶液

使用商业漂白剂在废液中形成10%(v/v)溶液或进行表面消毒

酒精(如乙醇、异丙醇)

有效浓度:乙醇为70%,异丙醇为60-70%

对细菌有效。乙醇对绝大多数病毒有效,但对无包膜病毒无效

异丙醇对病毒无效

醛是刺激物,其使用应有限

酚类消毒剂不支持作为欧盟生物杀灭剂产品指令审查计划的一部分,应避免使用。

网址:www.pschina.com.cn

电话:400-800-5586


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