间充质干细胞应该如何分离
间充质干细胞(MSC)具有多谱系分化的能力,产生多种间充质表型,例如成骨细胞(骨)、脂肪细胞(脂肪)和软骨细胞(软骨)。
目前已可从多种组织中分离出间充质干细胞,包括人骨髓、脂肪组织、脐带和牙髓。以下是一个简单的通用实验方案,可用于从各种组织来源获得MSC。
注意:MSC种群因供体而异,可能需要进一步优化。
取适量在无菌条件下收集的新鲜组织抽吸物。
用70 mm滤网(CLS431751)过滤细胞悬液以去除任何细胞团块。
在台式离心机中将细胞以500g沉淀5分钟。
重悬细胞,并用台盼蓝(T8154)排除法确定细胞的产量和活力。
在10 ml完全MSC培养基 (SCM015 or SCM045)中以25 × 106细胞/ml的密度在T75培养皿中培养细胞。将板在37℃、5%CO2下在加湿培养箱中静置孵育。
3小时后,更换培养基,换成10 ml新鲜的完全培养基,除去积聚在培养皿表面上的非粘附细胞。
再培养8小时后,用10 ml新鲜的完全培养基更换培养基。此后,每8小时重复该步骤,直至完成72小时的初始培养。
细胞可以2 × 106个细胞/小管的密度混入MSC生长培养基及10% DMSO(D2650)中冷冻。
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