微生物污染的常见原因和预防措施

支原体

支原体是一种不具有细胞壁的细菌，因此不受通过抑制细胞壁形成来抑制细菌生长的抗生素的影响。支原体的形态多变，且细胞大小在0.15至0.3μm范围内，而标准的细胞培养过滤方法通常使用0.22μm孔径的过滤器，这意味着支原体很难被过滤掉。与绝大多数的其他细菌污染物不同，支原体不会被肉眼检查到，并且由于其形态和特别小的尺寸而很难用光学显微镜进行检测。培养物中的支原体滴度可以达到108个生物/mL而不会导致培养基混浊。它们虽然通常不会杀死感染的哺乳动物细胞，但会通过改变细胞代谢、引起染色体畸变、减缓细胞生长和干扰细胞附着而对培养物造成严重影响。简而言之，支原体会显著影响使用受影响细胞系进行的绝大多数实验的结果。

实验室中各种来源的支原体污染是很大的挑战。除了通过污染的补充剂（如胎牛血清）引入外，由于某些支原体物种存在于人体皮肤上，因此还会因无菌技术不足而引入。 支原体在邻近的污染细胞培养物中高度可传播。因为孔径为0.22或0.45μm的标准培养基过滤装置无法过滤掉这些微小生物，所以必须用孔径为0.1μm或更小的膜过滤培养基和缓冲液。

预防、检测和消除支原体污染

支原体一旦污染了培养物，就会迅速扩散到实验室的其他区域。严格遵守良好实验室规范是关键，强烈建议对支原体进行常规检测，以成功控制支原体污染。三种最常用的检测方法包括支原体培养、 DNA染色法和PCR检测。我们为支原体的检测和消除提供了多种解决方案。即使您觉得实验室中不存在这种污染物，建立常规的培养物支原体筛查也至关重要。

病毒污染

病毒是培养过程中最难检测的细胞培养污染物之一，需要用显微镜检查，而这对绝大多数研究实验室来说不切实际。病毒可能来源于患者或宿主动物细胞，已经有几种具有生物技术意义的细胞系含有内源性逆转录病毒。 更多时候，细胞是被存在于用于培养它们的动物源材料中的病毒感染的。小尺寸的病毒很难从培养基、血清和其他生物来源的溶液中去除。但是，由于大多数病毒具有宿主特异性，甚至具有组织特异性，这会限制其跨物种或跨组织感染的能力。虽然病毒在细胞培养中比许多研究人员认识到的更为常见，但如果它们不会对细胞产生细胞病变或其他不利影响，它们可能会严重干扰细胞培养，也可能不会。

除了会影响培养细胞的性能之外，使用病毒感染细胞培养物的一个主要问题是它们对实验室人员会造成潜在健康危害。在处理来自人类或其他灵长类动物的组织或细胞时，应始终使用特殊的安全预防措施，避免病毒感染（HIV、乙型肝炎、艾巴氏、猿疱疹B型病毒等）从细胞培养物传播到实验室人员。在处理潜在的危险组织、培养物或病毒时，应咨询机构环境安全员。有关细胞培养实验室人员风险评估的更多信息，请单击此处。

降低细胞培养物病毒污染发生率的最佳措施：
*限制提取细胞的生物来源（供应商、动物）的数量。
*选择对病毒不是很敏感的动物/细胞。
*使用储存库的源细胞进行病毒检测并提供无病毒细胞系的认证。

化学污染

无生命的细胞培养污染物通常归为“化学”污染物。 这些污染物可能来自培养基或缓冲液中使用的试剂或水，或来自设备和日常用品。 例如自由基、金属离子、消毒剂/洗涤剂残留物，甚至是上游细菌污染物去除后持续存在的内毒素。

防止化学污染的提示：
*始终使用 实验室级水制备缓冲液和溶液，以及重悬冻干的试剂。
*任何可重复使用的实验室器皿必须彻底冲洗、风干——高压灭菌对洗涤剂残留物没有影响。
*只从提供内毒素检测认证的供应商处获取培养基、补充剂和血清(FBS, FCS)。

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