细菌、真菌（包括霉菌）和酵母污染通常肉眼可见，因为培养基的浊度和颜色会迅速改变（前提是培养基补充有酚红这一最常见的无毒pH指示剂）。标准的光学显微镜还可揭示细菌和真菌的结构，因此每日用显微镜观察培养物可在早期检测到微生物污染，一旦第一个迹象出现，就能采取适当的行动。特别是，需要迅速去除污染的培养物，从而保护邻近的培养物和无菌的组织培养环境，包括培养箱、浴室和生物安全柜。另外， 细菌和真菌的特定检测应作为常规和定期质量控制筛选程序的一部分。

微生物污染的常见原因和预防措施

根源/原因及预防措施

技术：    

操作、移取、加液    

非无菌表面和设备——清除未立即使用的物品的工作区域。    

瓶颈和瓶外以及工作台上有溢出物——定期用70%酒精擦拭。不要倾倒液体。用移液器、自动分液器或转移装置加液。如果必须要倾倒，则：（1）平稳进行，（2）丢弃倒出的瓶子。    

触摸或握持移液管时太靠近尖端，触摸瓶颈、螺旋盖内部——在刻度上方握持移液器。用外包装套管处理无菌移液器。    

从废液杯中回溅——用漏斗将废液丢弃到烧杯中，或者尽可能使用真空抽吸废液。    

培养物或瓶子上沉淀的灰尘或皮肤颗粒；手或器具放在敞开的板、瓶、皿上方——切勿在敞开的容器上方过手、工作。不要在敞开的瓶或皿上方（垂直层流和开放式工作台）或后方和上方（水平层流罩）工作。    

操作员的头发、手、呼吸、衣服    

皮肤、头发或衣物上的灰尘掉落或吹入培养物中——彻底洗手，穿上无绒实验室服。使用专为培养室准备的实验室服。扎起长发或戴上帽子。必须说话时要背向操作台。    

谈话、咳嗽、打喷嚏等产生的气溶胶——避免感冒时工作，或者戴口罩。    

材料和试剂    

溶液    

非无菌试剂和培养基——使用前将溶液过滤或高压灭菌。    

灭菌不彻底——使用记录温度计或无菌指示器监控高压灭菌器的性能。如果怀疑有污染，则检测或培养灭菌溶液。    

商业供应商的质量控制不佳——仅从质量和来源有保证的信誉良好的供应商处购买培养基、缓冲液和血清。    

玻璃器皿和螺旋盖    

储存过程中沾染的灰尘和孢子——盖子用箔覆盖。在将瓶子放到机罩之前，用70%酒精擦拭。    

仪器、移液器    

无菌性不可靠——使用来自信誉良好的供应商的独立包装、无菌的一次性用品。使用前采取干热法对可重复使用的物品进行消毒。    

接触非无菌表面或其他材料——不要抓握仪器或移液器的会进入培养容器的部分。    

使用的培养瓶和培养基瓶    

来自培养箱或冰箱的灰尘和孢子——使用螺旋盖代替塞子。瓶子在放入机罩之前进行擦拭。对板使用二级防护。    

储存或孵育条件不佳 ——在储存或孵育期间用铝箔盖住瓶盖和瓶颈。定期清理储存空间和培养器。    

盖子下有培养基并流到瓶外——丢弃所有瓶颈外部有溢出物的瓶子。不要倾倒。    

仪器和设备    

室内空气    

穿堂风、涡流、湍流、灰尘、气溶胶——为组织/细胞培养物提供合适的空间。减少人流量和无关的活动。定期擦拭地面和工作台。    

层流生物安全柜    

过滤器穿孔——定期检查过滤器的孔以及是否渗漏。    

过滤器不干净——检查过滤器上的压降。    

溢出物，特别是在工作台的缝隙或下方——定期对工作台四周和下方进行消毒。确保酒精进入缝隙。    

CO2加湿培养箱    

在潮湿的环境中，壁和架子上容易滋生霉菌和细菌——根据制造商说明书定期清理并进行适当消毒。    

强制空气循环中携带的孢子等——将打开的皿放入带有密封盖的塑料盒中（但不要密封盖子）。    

水浴锅等设备    

用于加热溶液的水浴锅受到污染——定期清洗水浴锅并消毒；用70%酒精彻底擦拭容器，干燥后再转移到生物安全柜中使用。    

高压气瓶、泵等上的灰尘——考虑使用非水基（珠）加热浴。在放进培养室之前，用70%酒精擦拭。    

引进的细胞系    

输入的生物材料    

怀疑在源头或运输过程中被污染——单独处理这些细胞系，最好隔离检疫。在不加抗生素的情况下将培养物培养两周，以此检查是否污染。通过相差显微镜和支原体Hoechst/DAPI染色，目测检查污染情况。    

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