高效液相色谱HPLC故障问题排查(九)
高效液相色谱HPLC故障问题排查之九
问题:峰高变化(一个或多个峰)
可能的原因:
1、一个或多个样品组分变质或色谱柱活性发生变化。
2、漏液,特别是在进样口与色谱柱入口之间。(保留时间也会改变。)
3、样品量不一致。
4、检测器或记录器设置被更改。
5、检测器灯能量不足。
6、检测器流通池污染。
排查方法:
1、采用新鲜样品或标样,以确认样品是否为问题的根源。如果某些或所有峰值仍小于预期值,则更换色谱柱。如果新的色谱柱改善了分析,则尝试运用适当的程序,再生旧的色谱柱。如果性能未得到提高,则丢弃旧的色谱柱。
2、检查系统是否有松动的配件。检查泵是否有漏液、是否有盐析出和异常噪音。必要时更换泵密封件。
3、确保样品一致。对于固定体积定量环,使用2-3倍环体积以确保环被完全充满。确保自动进样器样品瓶中有充足的样品且没有气泡。检查进样针是否有空气。在具有洗涤或冲刷步骤的系统中,确保洗涤溶液不会沉淀样品组分。
4、检查设置。
5、更换灯。
6、清洗流通池。
问题:选择性发生变化
可能的原因:
1、增加或减少溶剂离子强度、pH或添加剂浓度(特别影响离子溶质)。
2、色谱柱被更换,新色谱柱的选择性与旧色谱柱不同。
3、样品被注入错误的溶剂,或者过量注入强溶剂(100-200 μL)。
4、柱温发生变化。
排查方法:
1、检查流动相的组成。
2、确认色谱柱填料类型。对于可再现分析,使用相同的色谱柱类型。确定变化是否逐渐发生。如果是,则键合相可能已被剥离。色谱柱活性可能发生改变,或色谱柱可能已被污染。
3、调节溶剂。尽可能在流动相中注入样品。
4、调节温度。如果必要,使用柱温箱保持恒温。
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