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高效液相色谱HPLC故障问题排查（三）
高效液相色谱HPLC故障问题的自我排查之三
问题：保留时间不定
可能的原因：
1、漏液。
2、流动相成分发生变化。（小变化亦可能导致保留时间发生较大的变化。）
3、泵中有空气。（保留时间随机增加和减少。）
4、柱温波动。（在离子交换系统中尤为明显。）
5、色谱柱过载。（注射在柱上的溶质质量超过柱容量时，保留时间通常会减少。）
6、样品溶剂与流动相不相容。
7、色谱柱问题。（并非保留时间不稳定的常见原因。随着色谱柱老化，保留时间逐渐减少。）
排查方法：
1、检查系统是否有松动的配件。检查泵是否有漏液、是否有盐析出和异常噪音。必要时更换泵密封件。
2、检查流动相的组成。如果流动相是按照比例值机器混合的，则手动混合并从一个储液罐供应。
3、排出泵头或单向阀的空气。必要时更换泵密封件。确保流动相脱气。
4、使用可靠的柱温箱。 （注意：较高的色谱柱温度可提高色谱柱效率。为获得最佳结果，洗脱液应先加热再导入色谱柱。）
5、注入较小的体积（例如10 μL，而不是 100 μL）或在1:10或1:100稀释样品后注入相同的体积。
6、调节溶剂。尽可能在流动相中注入样品。
7、替换为相同类型的新柱，以确认是否因色谱柱的原因。如果再生程序失败，则丢弃旧的色谱柱。
问题：解析度降低
可能的原因：
1、流动相污染或变质（引起保留时间和/或选择性变化）。
2、保护柱或分析柱阻塞。
排查方法：
1、制备新鲜的流动相。
2、取下保护柱（如果有）进行分析。必要时更换保护柱。如果分析柱阻塞，可反洗。如果问题仍然存在，则色谱柱可能被强保留污染物堵塞。建议使用适当的再生程序。如果问题仍然存在，则更换入口处的筛板或更换色谱柱。
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