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高效液相色谱HPLC如何防止流动相

在实验中，高效液相色谱HPLC常常出现各种问题，近期我们就主要讲讲常见的HPLC问题。今日主题：高效液相色谱HPLC如何防止流动相？

色谱图灵敏度低，基线上升、噪音、尖峰等通常因流动相所致。在梯度洗脱中，流动相中的污染物特别麻烦。它们可能会使基线上升，随着受污染的组分增加，可能出现伪峰。

水是反相分析中最常见的污染源。在配制流动相时，只能使用高纯度的蒸馏水或去离子水。然而，几种常见的脱离子剂会将有机污染物带入水中。要去除这些污染物，让去离子水通过活性炭或制备型C18柱。

仅使用HPLC级溶剂、盐、离子对试剂和酸碱改性剂。清洁质量较低的溶剂非常耗时，通常会残留痕量的污染物。使用高灵敏度UV或荧光检测器时，这些痕量污染物可能会导致问题。

因为许多水相缓冲液会促进细菌或藻类的生长，所以应新鲜制备这些溶液，并在使用前进行过滤（0.2 μm或0.45 μm过滤器）。过滤还能够去除可能产生基线噪音或堵塞色谱柱的颗粒。通过向水相缓冲液中加入约100 ppm的叠氮化钠来防止微生物生长。也可将这些缓冲剂与20％或更高的有机溶剂（例如乙醇或乙腈）混合。

为防止系统中出现气泡，对流动相溶液脱气。通常首选在线脱气机，但如果流动相不含任何挥发性成分，则可以选择使用喷氦脱气。

小心使用离子对试剂。每次分析必须确定最佳链长和试剂浓度。浓度可低至0.2 mM，或高至150 mM或更高。通常，增加浓度或链长会增加保留时间。高浓度（> 50％）的乙腈或一些其他有机溶剂会沉淀离子对试剂。离子对试剂有些盐不溶于水并会沉淀。在存在长链磺酸（例如十二烷基硫酸钠）的情况下，应避免这种情况，用含钠缓冲液代替含钾缓冲液。

当您希望回收化合物用于进一步分析时，挥发性酸碱改性剂（例如三乙胺（TEA）和三氟乙酸（TFA））是有用的。这些改性剂还可以避免与离子对试剂相关的问题。它们还可以0.1至1.0％TEA或0.01至0.15％TFA的浓度添加至缓冲液中。增加浓度可以改善某些化合物的峰形，但会改变保留时间。

HPLC系统的组成部分