死体积(dead volume,V0)——由进样器进样口到检测器流动池未被固定相所占据的空间。它包括4部分：进样器至色谱柱管路体积、柱内固定相颗粒间隙（被流动相占据，Vm）、柱出口管路体积、检测器流动池体积。其中只有Vm参与色谱平衡过程，其它3部分只起峰扩展作用。为防止峰扩展，这3部分体积应尽量减小。

　　死时间(dead time,t0)——不保留组分的保留时间。即流动相（溶剂）通过色谱柱的时间。

　　测量系统死体积通常需要通过实验进行测量，常用方法是通过进一针和色谱柱固定相没有任何作用的特殊溶液时，就会得到一个色谱峰，由此峰可以测得死时间（t0），这就是t0的实测结果。

　　然后通过计算得到系统死体积:

　　死体积（V0)=死时间t0×流动相的流速F。

　　减少死体积

　　在我们使用或维护的过程中，如果涉及管路等配件的更换，应该选择与原规格一致的配件，以确保死体积与原来一致，避免死体积的增加而带来峰形的展宽。

　　接装色谱柱时，需确保管线接头匹配完好（特别注意peek管接头的使用，以及管线与色谱柱的连接处）避免形成接头空腔。

　　那什么时候应选择哪种接头？

　　不锈钢接头是获得可靠的高压密封的最佳选择

　　带前后密封垫的Swagelok压力型接头——具有最佳密封性能——可用于市面上全部的液相色谱系统

　　PEEK（<400 bar系统压力）接头适用于以下情况：

　　•经常更换的连接，比如连接不同色谱柱

　　•对于压力的要求较

　　聚酮

　　•方便的手紧柱连接

　　•最高使用压力600 bar

　　•与不锈钢管线连

　　液相的高压接头

　　•最高使用压力1200 bar，部件号5067-4733（还有长和超长规格，与带长和超长螺母的色谱柱兼容）

　　•可更换

　　PEEK和聚酮接头尤为适用于需要经常更换的连接，或需要生物兼容性时。也在对压力要求不高时使用，如色谱柱的出口接头。PEEK接头的最高使用压力为200 bar，聚酮接头为600 bar。

　　驻留体积的定义

　　驻留体积是指溶剂首次混合点（通常在液相色谱仪的混合腔内或比例阀中）与液相色谱柱头之间的体积。其中，低压混合系统的驻留体积等于从比例阀经泵和其他系统组件到柱头的体积总和。高压混合系统的驻留体积等于从溶剂首次混合点，经过两个计量泵再到柱头的体积总和。

　　在等度分离中，驻留体积对保留时间没有任何影响，而在梯度分离中则会造成重大影响。若不了解系统的驻留体积，可能会带来严重影响，因为驻留体积有可能远大于色谱柱体积。

　　相同色谱柱，不同仪器

　　若想在不同仪器上使用相同尺寸的色谱柱，往往需要考虑驻留体积这个问题，因为不同驻留体积的仪器使用同一方法也可能影响分析结果。在柱头开始梯度洗脱时，需要确保通过色谱柱的流动相体积相同。如果流动相的体积不相同，结果也将不同。

　　若在两个实验室内对不同驻留体积的HPLC仪器使用相同的方法，运行结果很可能不完全相同，因为两种（或多种）流动相混合形成梯度后，将在各个仪器的流路内经过一段不同的时间后方能到达柱头。因此，进样后受时间影响，分析物将通过不同的流动相组分，其保留时间和分离度也会受到影响。如果将梯度方法从一台仪器转移到另一台仪器，保留时间会根据两个系统的驻留体积发生变化。流路体积越接近，结果的一致性越高。

　　结果如有差异，可采用多种方法加以纠正。若仪器的驻留体积较小，可以通过增加仪器的体积来调节驻留体积；若仪器的驻留体积较大，可以减小仪器连接管线的内径和长度。此外，还可以在该方法中设置梯度延迟，以补偿流路系统中的不同驻留时间。

　　网址：www.pschina.com.cn

　　电话：400-800-5586